超声波细胞破碎仪破碎细胞常见问题

大肠杆菌表达外源蛋白，超声处理后悬浮于含1％triton-X-100的PBS中，超声效果更佳，1％triton-X-100效果依然明显。有些细菌也有效。

细菌沉淀直接加入样品1b缓冲液，加入5ul巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接加载，染色和脱色步骤如下：将胶水放入适量的微波炉中染色液中1min ，大量更换染色溶液。水可以在微波炉中煮10分钟。

表达重组蛋白后，用超声波破碎细胞，使用400w冰浴，破碎2s 1s，但在短时间内产生大量泡沫，影响破坏力。超声波细胞破碎器。 pbs和tris缓冲区都是这样的。它不完全破碎，目标蛋白质存在于这些未破碎的细胞中。

1.由于未设置探头位置，将生成气泡。探头必须靠近底部，大约25px。功率会根据超声波电池的破损而变化，但您可以观察液位，有波动但不会太强烈。

2，打破3S停10S，打破二三十次看。

3，喇叭的位置也应注意，如果声音错误，应及时调整。另外，从细菌浓度的观点出发可以考虑。粉碎时尽量增加体积，强度不应超过60％。

4，试着停止8s持续8s，对于一些细菌蛋白质，你的方法很难散热，导致蛋白质变性产生气泡，最好的暂停时间稍长，这种情况更常见的是包涵体蛋白质的形式。

链霉菌超声处理的条件是什么？

  1.将细菌24小时培养液以5000转/分钟离心5分钟以收集细胞。

  2.用pH7.5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次，然后将细菌与缓冲液混合成1：3的细菌悬浮液。置于40 mL大塑料试管中

  3.将大塑料试管放入冰浴中，用超声波破碎（功率200 W，1/2“探头，压碎30 s，间歇30 S）

  4.将破碎的液体以12000r / min的速度高速离心30分钟以收集细胞碎片和上清液。

超声波灭菌过程基本上与上述相同，即洗涤池也可以用预先冷却的生理盐水或pH8 Tris-HCl洗涤一次。另外，超声剂量随样品和细菌的量而变化很大。超声波细胞破碎机的功率可以达到400-600w，超过5s，停止5s，冰浴，并添加终浓度为1mM的PMSF。为了确定超声的适当强度和频率，有必要随时观察细胞是否完全破裂。放线菌属于革兰氏阳性细菌的克隆组，在原核系统的系统发育树上具有高摩尔百分比。虽然它具有原核生物独有的分子和生物学特性，但不同组中细胞壁的化学成分发生巨大变化

在大肠杆菌超声检查中，方法为400W，超5停5，效果好，但用于链霉菌，似乎没有效果。是否由于细胞壁组成的差异，因为大肠杆菌是革兰氏阴性细菌。

另一项显微镜检查是为了测试破碎效果，但细胞破坏程度与我需要的酶摄取之间是否存在直接关系？长休息时间也会影响酶的活性。所以我想问一下anaisai同志，你提供的“200 W，1/2”探头，30 s断裂，间歇性30 S“条件似乎用于打破链霉菌孢子，但也可用于发酵后离心泥？如果是这样，你休息的总时间是多少？

如果您需要细胞内酶，细胞破坏程度与所需的酶获取之间基本上存在比例关系。长休息时间确实会影响酶的活性。这需要判断Zui良好的休息时间和酶活性。 Zui的直接方法是首先绘制相关曲线。

在我的实验中，破碎的细菌是棒状细菌，破碎时间控制在约30分钟，酶活性更好。

如果是基质菌丝，最好考虑使用溶菌酶。